Video Overlay Titlle
Video Overlay description
This is a healthcare professional site
The information contained in the site is intended for US healthcare professionals only. By selecting “Okay” below, you verify that you are a licensed US healthcare professional.
No
ทำไมถึงใช้แอนติบอดี CLDN18 สำหรับตรวจ CLDN18.2 ในตัวอย่างชิ้นเนื้อมะเร็งกระเพาะอาหาร/ GEJ
แอนติบอดีต่อ CLDN18.2 สามารถตรวจพบ CLDN18 ได้ทั้ง 2 isoform ได้แก่ CLDN18.1 และ CLDN18.2 แต่ในการใช้กับกลุ่มโรคมะเร็งกระเพาะอาหารและ GEJ จะใช้ดูการแสดงออกของ CLDN18.2 เป็นหลัก เนื่องจาก2,3
- CLDN18.1 พบในมะเร็งปอดชนิด adenocarcinoma เป็นหลัก3
- CLDN18.2 พบในเยื่อบุกระเพาะอาหารปกติ และยังคงแสดงออกแม้ว่าจะกลายเป็นมะเร็ง3
การเตรียมสิ่งส่งตรวจและ ขั้นตอนก่อนการส่งตรวจ (preanalytic process)
การเตรียมสิ่งส่งตรวจที่เหมาะสมมีความจำเป็นอย่างมากต่อความแม่นยำในการย้อมสี1
การเตรียมสิ่งส่งตรวจสำหรับการย้อม CLDN18.2
Takeshi Kuwata, MD, PhD
การเตรียมสิ่งส่งตรวจ
Guidelines แนะนำให้มีการดูแลรักษาเครื่อง tissue processor ตามคำแนะนำของผู้ผลิต และมีการควบคุมคุณภาพของสารที่ใช้ในการ process ชิ้นเนื้อ เช่น ค่า pH ของฟอร์มาลิน, การปนเปื้อนของน้ำในแอลกอฮอลล์1
Cold ischemic time
Cold ischemic time ไม่ควรเกิน 60 นาทีตาม guidelines ปัจจุบัน1
การตรึงชิ้นเนื้อ (Fixation)
ข้อแนะนำเรื่องขนาดของสิ่งส่งตรวจและเวลาในการ fixation ดังนี้1
ประเด็นสำคัญ
น้ำยา fixative จะต้องมีปริมาณมากพอที่จะท่วมชิ้นเนื้อได้หมด ชิ้นเนื้อทั้งหมดต้องจม (completely submerged) ในน้ำยา
โดยอัตราส่วนของปริมาตร fixative: ชิ้นเนื้อต้องไม่น้อยกว่า 4:1 โดยอัตราส่วน 10:1 จะให้ผลดีที่สุด
ควรทำละลายพาราฟินที่อุณหภูมิน้อยกว่า 60°C
สิ่งส่งตรวจต้องมีปริมาณเพียงพอสำหรับการวิเคราะห์
ระยะเวลา
แช่ชิ้นเนื้อใน 10% neutral phosphate-buffered formalin (pH 7.0) เป็นเวลาอย่างน้อย 6 ชั่วโมง (แต่ไม่เกิน 24 ถึง 36 ชั่วโมง)
หากสิ่งส่งตรวจมีปริมาณไขมันสูง อาจต้องแช่นานถึง 48 ชั่วโมง
การตรึงชิ้นเนื้อที่ไม่เหมาะสม
การเตรียมสิ่งส่งตรวจใน pre-analytical phase มีความสำคัญมาก เพื่อลดการเกิด artifacts ในการติดสี ซึงส่งผลต่อความแม่นยำในการแปลผล
Cytoplasmic blushing due to suboptimal fixation, which can interfere with accurate membranous scoring.
การเตรียมสิ่งส่งตรวจ
พาราฟินบล็อค (formalin-fixed, paraffin-embedded (FFPE)) ที่ใช้ในงานประจำ สามารถนำมาส่งตรวจ IHC ได้
สิ่งส่งตรวจจาก FNA, cytology หรือชิ้นเนื้อจาก มะเร็งแพร่กระจายไปกระดูก (metastatic bone lesion) ไม่เหมาะสมสำหรับการส่งตรวจ CLDN18
ตัด section หนา 3-6 ไมครอน*
สไลด์ต้องแห้งสนิทก่อนทำการย้อม โดยอาจทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้อง (air dried) หรือใช้ตู้อบที่ 60 เซลเซียสเป็นเวลา 60 นาที
*CLDN18-specific.
การเก็บรักษาสิ่งส่งตรวจ2
เพื่อให้มั่นใจว่าสิ่งส่งตรวจยังคงมีความสมบูรณ์
ควรเก็บรักษาในที่ๆมีคุณสมบัติดังนี้
แห้ง
ไม่มีแมลง
อุณหภูมิห้อง (18-25 องศาเซลเซียส)
การส่งตรวจ
ตัวเลือกในส่งตรวจ CLDN18.2 IHC
มี assay, antibodies และเครื่องย้อมหลายชนิดที่สามารถใช้ในการตรวจ CLDN18.2 เช่น VENTANA CLDN18 (43-14A), the LSBio PathPlus™ CLDN18 Antibody และ Abcam Recombinant Anti-Claudin 18 antibody (43-14A). สำหรับเครื่องย้อมที่สามารถใช้ได้ ได้แก่ BenchMark ULTRA, Dako Autostainer, และ Leica Bond4
ตัวอย่างข้างต้นนี้ไม่ได้ครอบคลุมทุกตัวเลือกที่มี และยังไม่ได้รับการอนุมัติจาก EMA ในการให้เป็น Companion Diagnostics อย่างสมบูรณ์ (ข้อมูล ณ เดือนมีนาคม 2024)
โปรดใช้การทดสอบที่เหมาะสมเพื่อเป็นแนวทาในการตัดสินใจทางคลินิก
VENTANA CLDN18 (43-14A) IVD Assayเรียนรู้เพิ่มเติม
LSBio PathPlusTM CLDN18 Antibodyเรียนรู้เพิ่มเติม
Abcam Recombinant Anti-Claudin 18 antibody (43-14A)เรียนรู้เพิ่มเติม
How to Test for CLDN18.2
Christoph Röcken, MD
การเลือก control ที่เหมาะสม
การเลือกใช้ Control ที่เหมาะสมมีความสำคัญสำหรับการตรวจ CLDN18.2 ในชิ้นเนื้อมะเร็งกระเพาะอาหาร/ GEJ โดยมีประเด็นสำคัญดังนี้
การ Validate Control
Guideline แนะนำให้แลปต่างๆทำการ validate การย้อมอิมมูโนฮิสโตเคมีก่อนนำมาใช้ในงานประจำ โดยมีทั้งตัวอย่างชิ้นเนื้อ positive, negative และ borderline ซึ่งล้อไปกับการแปลผลจริง
ชิ้นเนื้อ control นี้มีการจัดจำหน่ายโดยผู้ผลิตรายต่างๆ
การทดลองย้อม control (Run controls)
- แนะนำให้ทำการทดลองการย้อมสี ในชิ้นเนื้อดังต่อไปนี้
- ชิ้นเนื้อกระเพาะอาหารที่มี intestinal metaplasia เป็นตัวอย่างที่ดีของ negative และ positive control โดยแสดงผลดังนี้2:
- เนื้อเยื่อกระเพาะอาหารปกติติดสีแบบ membranous, strong
- ส่วนที่มี metaplasia ติดสีแบบ membranous, weak to moderate
- ส่วน lamina propria, lymphocytes, smooth muscle และ peripheral nerve ไม่ติดสี
- หาก positive control ไม่ติดสี แสดงว่าตัวอย่างชิ้นเนื้อนี้ไม่สามารถใช้ได้2
- ตัวอย่างที่เป็น known positive control ควรเก็บไว้ใช้ในกรณีต้องการทดสอบประสิทธิภาพของ reagent และเครื่องมือที่ใช้งาน โดยไม่นำมาใช้ในการย้อมเพื่อแปลผลตามปกติ
ประสิทธิภาพของเครื่องย้อมและแอนติบอดี
ในการศึกษาเพื่อประเมินความสามารถในการทำซ้ำ (reproducibility) และ comparability ของ CLDN18.2 แอนติบอดี้และเครื่องย้อม 3 ชนิดจากห้องปฏิบัติการทั่วโลกจำนวน 27 แห่ง พบว่า4,*,†
- ประสิทธิภาพ (accuracy, sensitiviry, specificity) ของชุดทดสอบ VENTANA CLDN18 (43-14A) IVD มี reproducible rate มากกว่า 95% ในห้องปฏิบัติการทั้ง 27 แห่ง เมื่อเทียบกับ consensus reference4
- ซึ่่งให้ผลเทียบเท่ากับ แอนติบอดี LSBio เมื่อย้อมโดยใช้เครื่องย้อมของ Dako หรือ Leica4
- แอนติบอดี LSBio มีการติดสีที่ reproducible4
*Antibodies in the study comprised the VENTANA CLDN18 (43-14A) IVD Assay from Roche Tissue Diagnostics, the PathPlus™ CLDN18 Antibody from LSBio, and the Claudin-18 Antibody from Novus Biologicals. Platforms comprised BenchMark ULTRA, Dako Autostainer, and Leica Bond.4
†Consensus reference scores from all antibodies for each sample were determined by central pathology review. CLDN18.2 positivity was defined with a threshold of ≥75% of tumour cells expressing membranous CLDN18 with moderate-to-strong (≥2+) staining intensity. Accordingly, participating pathologists were required to submit a binary positive/negative call as well as an estimation of the percent of cells stained. Laboratory-submitted IHC scores were compared to the reference consensus score and considered discordant if the positive/negative binary result differed. Statistical analysis was performed for comparison, and an acceptance criteria of 85% (≥0.85) was applied.4
การทดสอบแบบสะท้อนกลับ (Reflexive tesing) จะช่วยปรับปรุงผลการรักษาคนไข้ให้ดีขึ้น
ความล่าช้าในการตรวจ biomarker อาจทำให้ผลลัพธ์ทางคลินิกแย่ลง
Guidelines แนะนำให้ทำการส่งตรวจ biomarker ทั้งหมดที่สามารถทำได้ และมีผลต่อการรักษา เช่น HER2 โดยส่ง ณ เวลาที่วินิจฉัยหรือสงสังว่าโรคมะเร็งกระเพาะอาหารอยู่ในระยะแพร่กระจาย6
ESMO guidelines แนะนำให้ตรวจ CLDN18.26
หากมี biomarker ตัวใหม่ก็ควรส่งตรวจไปพร้อมๆกับ biomarker ตัวอื่นๆเพื่อการรายงานผลที่ทันท่วงที6,7
การทดสอบแบบสะท้อนกลับ (Reflexive testing) ช่วยให้เริ่มการรักษาด้วย targeted therapyได้เร็วขึ้น ช่วยให้ผลลัพธ์ทางคลินิกดีขึ้น
การศีกษาในกลุ่มผู้ป่วยมะเร็งกระเพาะอาหารระยะแพร่กระจาย ที่ประกอบไปด้วยมะเร็งหลายๆชนิด (N=1423) พบว่าการส่งตรวจ reflex testing protocol ณ เวลาที่ได้รับการวินิจฉัยโรค มีความสัมพันธ์กับการเพิ่ม overall survival7
OS 12 months
จากหลักฐานว่า Reflexive testing ช่วยให้ผลลัพธ์ทางคลินิกดีขึ้น พยาธิแพทย์จึงมีหน้าที่สำคัญที่จะส่งตรวจ biomarker ที่มีให้เลือกใช้และมีผลต่อการรักษาทั้งหมด.
Matteo Fassan, MD, PhD
References: 1. Compton CC, Robb JA, Anderson MW, et al. Preanalytics and precision pathology: pathology practices to ensure molecular integrity of cancer patient biospecimens for precision medicine. Arch Pathol Lab Med 2019;143(11):1346-63. 2. Ventana CLDN18 (43-14A) assay [package insert]. Mannheim, Germany: Roche Diagnostics GmbH. 3. Sahin U, Koslowski M, Dhaene K, et al. Claudin-18 splice variant 2 is a pan-cancer target suitable for therapeutic antibody development. Clin Cancer Res 2008;14(23):7624-34. 4. Jasani B, Schildhaus HU, Taniere P, et al. Global ring study determining reproducibility and comparability of CLDN18 testing assays in gastric cancer. Poster presented at: ESMO Targeted Anticancer Therapies Congress; March 6-8, 2023; Paris, France. 5. College of American Pathologists. IHC assays—New evidence-based guideline for analytic validation (04-01-2004). https://documents.cap.org/documents/ihc-validation-webinar-handout.pdf. Accessed 03-30-2023. 6. ESMO Gastric Cancer Living Guidelines (07-2023). https://www.esmo.org/living-guidelines/esmo-gastric-cancer-living-guideline/diagnosis-pathology-and-molecular-biology/article/ diagnosis-pathology-and-molecular-biology. Accessed 09-07-2023. 7. Piening B, Bapat B, Weerasinghe RK, et al. Improved outcomes from reflex comprehensive genomic profiling-guided precision therapeutic selection across a major US healthcare system [Abstract 6622]. J Clin Oncol 2023;41(Suppl 16).